• 中国最富1%家庭富二代在加拿大的生活 2019-12-06
  • 青岛因为这件事儿火了,你还不知道? 2019-12-06
  • 轻松一刻:世界杯精彩瞬间  呈现球技与激情  2019-11-29
  • 2016消费电子高峰论坛 2019-11-27
  • 正心正念 爱国爱教 佛界楷模 2019-11-21
  • “狼”来啦!历届世界杯吉祥物,你pick谁? 2019-11-19
  • 首届尧都文化旅游节新闻发布会在京举行 诚邀八方客感受帝尧魅力 2019-11-19
  • [大笑]精神心理科医生在等你…… 2019-11-19
  • 乌鲁木齐举办端午戏曲交响音乐会 两团一院名角新秀齐亮相 2019-11-18
  • 90后“技术宅”开黄色网站 半年非法牟利17万 2019-11-18
  • 拉美和加勒比地区孔子学院达39所 2019-11-17
  • 中国保险监督管理委员会原主席项俊波受贿案一审开庭 2019-11-17
  • 兰博基尼Urus定于2018年1月6日国内首发 2019-11-08
  • 小型无人机成反装甲神器?士兵若有它一人可干掉3辆坦克 2019-11-08
  • 为学生减负 小学数学实验浓缩58节课 2019-11-06
  • 桂平特产米饼:产品中心

    当前位置:平特四连肖心水资料>产品中心 >分子生物学试剂盒 >通用型原位杂交检测试剂盒

    敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅳ(CY3)

    平特四连肖心水资料 www.ogimu.tw Enhanced Sensitive ISH Detection kitⅣ(CY3)

    MK1033

    1280元/Kit  

    ISH

    原位杂交检测试剂盒

    现货

    选择规格:

    总价格:

    ---

    选择数量:

    - +

    Product Brief

    • 产品描述


      产品概况

      产品货号MK1033
      产品名称敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅳ(CY3)
      价格规格¥1280/100T/盒
      特异性地高辛标记的寡核苷酸探针
      保存条件4°C保存一年
      内容1.胃蛋白酶(×10;Pepsin):2ml;
      2.预杂交液:2ml;
      3.寡核苷酸探针杂交稀释液:2ml;
      4.封闭液:5ml;
      5.生物素化鼠抗地高辛:5ml;
      6.SABC-CY3:0.1ml;


    Instructions

    描述

    所谓原位杂交是指借助于核酸分子杂交的方法,在显微镜水平检测和定位特异的核苷酸片段。现在原位杂交已成为在分子水平研究肿瘤和遗传性疾病的发生,发展和调控等根本性问题的有力工具,其作用是免疫组化所无法代替的。 博士德专门设计了敏感性加强型原位杂交检测试剂盒。具有敏感性特高,操作简便和结果准确的优点。该试剂盒分为两种,一种为过氧化物酶检测,一种为碱性磷酸酶检测系统。 用于mRNA的杂交。MK1030和MK1032仅适于地高辛高效标记的寡核苷酸探针,不推荐使用每个探针分子仅标记一个地高辛的寡核苷酸探针。
    如果使用cDNA探针,应在杂交之前变性探针。

    用户自备试剂

    原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC, 0.5M PBS )

    操作流程

    一.培养细胞和冰冻切片
    准备工作:缓冲液的配备
    3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7·H2O)3g,PH2.0左右。
    2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3·2H2O,分子量294)8.8g。
    0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
    0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
    20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
    0.5 M PBS——1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4·12H2O 6g, NaH2PO4·2H2O 0.4g,PH7.2-7.6。
    操作程序:
    注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用.
    1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
    2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
    3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS,含有1/1000 DEPC。室温固 定20–30分钟。蒸馏水洗,干燥后可-20℃冰冻保存2周。
    4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。0.5M PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
    5.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱37-40℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
    6.杂交——用杂交稀释液 稀释地高辛标记的寡核苷酸探针,浓度一般0.5-2μg/ml。按每张切片加20μι杂交液。将原位杂交专用盖玻片的?;つそ业艉?,盖在切片上。恒温箱37—40℃杂交过夜。
    7.杂交后洗涤:去掉盖玻片,30—37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;0.5×SSC洗涤15分钟×1次;0.2×SSC洗涤15分钟×1次。必要时可重复0.2×SSC洗涤1次。
    8.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
    9.滴加生物素化鼠抗地高辛: 37℃60或室温120分钟。0.5M PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    10.滴加SABC-CY3:取1ul SABC –CY3 加原位杂交用PBS 100ul,每张切片加50ul,37℃30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤??芍苯佑糜庥庀晕⒕倒鄄?,细胞胞浆呈红色。二.石蜡切片
    如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 MPBS,含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一定不要超过1小时。
    1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
    2.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。
    3.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3–30分钟(视标本厚薄、新旧自行调整)。充分的消化可以使mRNA得到暴露,从而增强杂交信号;但另一方面,过度的消化又使切片明显减薄乃至消失,从而失去杂交信号。由于用户的切片情况各不相同,这就需要用户比较不同的消化时间,例如10分钟,20分钟,30分钟,以找到最佳的消化时间。0.5M PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
    其余步骤和冰冻切片6-15步相同。
    结果观察:阳性细胞的胞浆着色呈红色。
    注意事项:如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。有其它明显的非特异性染色现象时,可以用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—5倍。

    Related products

    暂无相关产品
  • 中国最富1%家庭富二代在加拿大的生活 2019-12-06
  • 青岛因为这件事儿火了,你还不知道? 2019-12-06
  • 轻松一刻:世界杯精彩瞬间  呈现球技与激情  2019-11-29
  • 2016消费电子高峰论坛 2019-11-27
  • 正心正念 爱国爱教 佛界楷模 2019-11-21
  • “狼”来啦!历届世界杯吉祥物,你pick谁? 2019-11-19
  • 首届尧都文化旅游节新闻发布会在京举行 诚邀八方客感受帝尧魅力 2019-11-19
  • [大笑]精神心理科医生在等你…… 2019-11-19
  • 乌鲁木齐举办端午戏曲交响音乐会 两团一院名角新秀齐亮相 2019-11-18
  • 90后“技术宅”开黄色网站 半年非法牟利17万 2019-11-18
  • 拉美和加勒比地区孔子学院达39所 2019-11-17
  • 中国保险监督管理委员会原主席项俊波受贿案一审开庭 2019-11-17
  • 兰博基尼Urus定于2018年1月6日国内首发 2019-11-08
  • 小型无人机成反装甲神器?士兵若有它一人可干掉3辆坦克 2019-11-08
  • 为学生减负 小学数学实验浓缩58节课 2019-11-06
  • 吉林快三任选走势图 全讯彩票游戏 吉林快三和值跨度走势图 股票指数是怎样计算的 欧冠巴塞欧洲盘口分析 上海时时乐开奖走势图连线 重庆快乐十分最快开奖 双色球微信 中国竞彩网 安卓梭哈单机版